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厚壳贻贝活性肽的制备及其作用机制研究

厚壳贻贝,多肽,抗氧化,Keap1/Nrf2信号通路,活性机制

以厚壳贻贝（Mytilus coruscus）为原材料，运用现代定向酶解技术，现代分离纯化鉴定技术制备活性多肽，研究其抗氧化活性、细胞损伤保护作用、并探寻发挥作用的活性通路。研究内容及结果如下：

（1）厚壳贻贝粉酶解产物经活性追踪分离、N端测序、质谱分析等最终鉴定为：H1：Leu-Ala-Ala-*-*（497.55 Da）；H2：Tyr-Glu-Leu-*-*（675.70 Da）；H3：Gln-Glu-*-*（539.54 Da）；H4：Gln-*-*（362.34 Da）；H5：Ser-Pro-Phe-*-*（610.67 Da）；H6：Gln-Glu-*-*（541.52 Da）；H7：Leu-Glu-Thr-*-*（533.54 Da）；H8：Gln-*-*（376.37 Da）。

（2）其中H1、H2、H3和H5对DPPH·、O₂·^-、ABTS·的EC₅₀分别为0.423±0.002，0.359±0.002，0.527±0.007，0.716±0.011 mg/ mL； 0.179±0.003，0.210±0.006，0.560±0.007，0.678±0.008 mg/mL；0.188±0.001，0.037±0.002，0.051±0.001，0.385±0.003 mg/mL，且H1、H2、H3和H5具有热稳定性，耐消化性。

（3）其中H1和H5能显著促进H₂O₂诱导损伤的HUVEC细胞内NO释放，提高SOD、GSH-PX、CAT、T-AOC水平，从而减少细胞内ROS产生，降低MDA、LDH含量，对氧化损伤细胞起到保护作用。

（4）Western blot实验显示H1和H5可使Keap1表达降低，Nrf2、HO-1、NQO1和GCLM表达上升。证实Keap1/Nrf2信号通路是H1、H5发挥抗氧化作用的通路。

综上，厚壳贻贝抗氧化肽H1、H5可以通过作用于Keap1/Nrf2信号通路，引起下游因子表达量变化，使细胞内ROS降低，从而发挥对HUVEC细胞的保护作用。本研究可以为厚壳贻贝酶解肽在心脑血管疾病的预防、治疗中的应用提供理论依据。