131 / 2021-11-09 13:11:50

RNA m6A靶向写入器的构建及其介导的次生代谢调控

m6A，靶向编辑，酿酒酵母，次生代谢调控

        脱氧核糖核酸和蛋白质的动态共价修饰在调节基因表达中起着重要作用。RNA最近被证明可以通过其自身的一系列转录后修饰来调节基因表达，其中包括m6A（N6-甲基腺嘌呤）修饰。同时，m6A与广泛的细胞功能联系密切。本研究以代谢背景明确的真菌（酿酒酵母）为研究对象来探索真菌RNA的靶向编辑技术。研究构建了基于CRISPR-dCas13-Ime4-NLS的RNA m6A书写器质粒，通过guide RNA序列和dCas13蛋白实现对特定RNA的靶向编辑。我们构建了基于外源gfp报告基因的合成生物学系统，重组至Leu2缺陷型酿酒酵母（BY4741）染色体上。利用该菌株为研究对象，考察m6A编辑器的对绿色荧光蛋白基因的转录产物的甲基化修饰功能以及其对GFP合成的调控作用。本研究对于设计基于RNA编辑的新型靶向次生代谢调控的合成生物学系统具有较好的科学意义。