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α-芋螺毒素MI抗血清的制备及解毒活性评价

α-芋螺毒素MI,抗原设计,抗血清制备,解毒活性

α-芋螺毒素MI抗血清的制备及解毒活性评价



张敏^1,†，余硕^1,†，张鑫²，黄秋园¹，黄悦¹，罗敏²，陈荣芳¹，韦园梅¹，马小莉¹，陈文文¹，陈则²，周晓巍¹，戴秋云<sup>1,*



1</sup>军事科学院军事医学研究院北京生物工程研究所，北京100071，中国

²上海赛伦生物技术有限公司，上海200031，中国





α-芋螺毒素MI是一种由14个氨基酸组成的小肽，含有两对二硫键，可有效作用于肌肉型烟碱乙酰胆碱受体（nAChRs）。由于其毒性高、分子量小且易合成，因此是一种潜在的生物恐怖剂。然而目前对于MI中毒无有效的治疗药物。前期我们探索了GI融合抗原、BSA偶联抗原、MI分支肽抗原的合成方法、免疫原性及抗血清对MI的解毒活性研究，结果均不理想。本工作我们通过点击反应将含炔基的MI与叠氮化修饰的牛血清白蛋白（BSA）偶联，用MI-BSA完整抗原免疫小鼠和马，从而制备相应的抗血清及马F(ab’)₂并评价其解毒活性。结果表明，鼠、马抗血清的滴度分别可达1:51200和1:204800。12.5 μL的鼠或马抗血清能够完全中和致死剂量的MI（0.4 μg, 1.7×LD₅₀），6.25 μL 的鼠抗血清或10.41μL的马抗血清能够使给予1.7×LD₅₀ MI的小鼠全部存活，并且F(ab’)₂对MI也有较好的中和及解毒活性。此外，鼠或马抗血清对与MI结构相似的α-芋螺毒素GI也表现出一定的交叉反应。本研究通过点击反应合成的MI-BSA抗原具有高免疫原性，免疫动物后可获得高活性的抗血清，为剧毒性α-芋螺毒素中毒救治及检测提供了一个有效手段，也为小分子多肽毒素抗体研究提供了一种通用抗原合成方法。